0 Aufrufe • 2:56 Min. • April 30th, 2023
- C. elegans wird als experimentelles Modell für die Infektion durch Darmpathogene verwendet, die Krankheiten verursachen, indem sie zum Teil die Darmbarriere stören und ihre Durchlässigkeit erhöhen. Um die Integrität der Barriere nach dem Kontakt mit einem Bakterium oder einer chemischen Verbindung von Interesse zu quantifizieren, sammeln Sie Würmer, indem Sie sie von ihren Platten waschen.
Als nächstes legen Sie diese Würmer auf Agarplatten mit markiertem Futter, das aus hitzeabgetöteten E. coli besteht, gemischt mit FITC-Dextran, einem Polysaccharid mit hohem Molekulargewicht und einer fluoreszierenden Markierung.
Lassen Sie die Würmer die markierten Bakterien fressen. Diejenigen mit intakten Darmbarrieren beseitigen die Nahrung schnell, während bei Würmern mit durchlässigerem Darm der fluoreszierende Marker über das Lumen des Organs hinaus vordringt.
Übertragen Sie die Würmer in eine Formaldehydlösung, um die Tiere zu fixieren. Ersetzen Sie nach 1 bis 2 Minuten das Formaldehyd durch Einbettmedien.
Zum Schluss bildest du die Würmer durch Fluoreszenzmikroskopie ab. Beachten Sie, dass das Darmgranulat von C. elegans autofluoreszierend ist, so dass es ein Hintergrundsignal gibt. In
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