FITC-Dextran-Fütterung: Eine Methode zur Quantifizierung der Darmpermeabilität bei C. elegans

0 Ansichten2:56 Min. • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- C. elegans wird als experimentelles Modell für die Infektion durch Darmpathogene verwendet, die Krankheiten verursachen, indem sie zum Teil die Darmbarriere stören und ihre Durchlässigkeit erhöhen. Um die Integrität der Barriere nach dem Kontakt mit einem Bakterium oder einer chemischen Verbindung von Interesse zu quantifizieren, sammeln Sie Würmer, indem Sie sie von ihren Platten waschen.

Als nächstes legen Sie diese Würmer auf Agarplatten mit markiertem Futter, das aus hitzeabgetöteten E. coli besteht, gemischt mit FITC-Dextran, einem Polysaccharid mit hohem Molekulargewicht und einer fluoreszierenden Markierung.

Lassen Sie die Würmer die markierten Bakterien fressen. Diejenigen mit intakten Darmbarrieren beseitigen die Nahrung schnell, während bei Würmern mit durchlässigerem Darm der fluoreszierende Marker über das Lumen des Organs hinaus vordringt.

Übertragen Sie die Würmer in eine Formaldehydlösung, um die Tiere zu fixieren. Ersetzen Sie nach 1 bis 2 Minuten das Formaldehyd durch Einbettmedien.

Zum Schluss bildest du die Würmer durch Fluoreszenzmikroskopie ab. Beachten Sie, dass das Darmgranulat von C. elegans autofluoreszierend ist, so dass es ein Hintergrundsignal gibt. Insgesamt deutet jedoch eine höhere Darmfluoreszenz auf eine höhere Permeabilität hin.

Im Beispielprotokoll werden wir die Wirkung der Behandlung mit dem Biomolekül DIM auf die Darmpermeabilität von Würmern untersuchen, die mit pathogenen Pseudomonas aeruginosa-Bakterien infiziert sind.

- Bereiten Sie die mit FITC-Dextran ergänzten Platten vor, indem Sie 2 Milliliter hitzeinaktivierte E. coli mit 4 Milligramm FITC-Dextran mischen. Geben Sie je 100 Mikroliter der Mischung auf 20 frische NGM-Agarplatten und lassen Sie die Platten eine Stunde lang auf einem sauberen Labortisch trocknen. Waschen Sie die Würmer nach 48 Stunden Behandlung mit S Buffer. Übertragen Sie sie auf FITC-Dextran-supplementierte Platten und auf NGM-Platten ohne FITC-Dextran und inkubieren Sie die Platten über Nacht.

Waschen Sie die Würmer am nächsten Tag mit S Buffer und lassen Sie sie eine Stunde lang in der frischen NGM-Agarplatte kriechen. Geben Sie 50 Mikroliter 4 % Formaldehyd in jede Vertiefung einer schwarzen 96-Well-Platte mit flachem Boden und geben Sie etwa 50 Würmer in jede Vertiefung. Entfernen Sie nach 1 bis 2 Minuten das gesamte Formaldehyd und geben Sie 100 Mikroliter Einbettmittel in jede Vertiefung.

- Formaldehyd ist eine giftige Chemikalie und sollte mit Vorsicht behandelt werden.

12:15

C. Elegans Darm als ein Modell für die interzelluläre Lumen Morphogenese und In Vivo polarisiert Membrane Biogenesis Ebene der einzelligen: Kennzeichnung durch Antikörper Färbung, RNAi Verlustfunktion Analyse und Bildgebung

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

08:04

Echtzeitmessung der epitheliale Barriere Permeabilität im menschlichen Darm Organellen

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:22

In Vitro und In Vivo Ansätze Darm Epithelzelle Durchlässigkeit zu bestimmen

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

09:44

Functional Assessment of Darmmotilität und Darmwand Entzündung in Nagetiere: Analysen in einem standardisierten Modell der intestinalen Manipulation

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

02:45

Beurteilung der Darmpermeabilität bei C. elegans nach bakterieller Exposition

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

06:04

Ex vivo-Darm-Sacs zu beurteilen Durchlässigkeit der Schleimhaut in Modelle von Magen-Darm-Krankheit

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

08:58

Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

07:23

Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

07:32

Ein intravitaler, auf Mikroskopie basierender Ansatz zur Bewertung der Darmdurchlässigkeit und der Epithelzellvergießen-Performance

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

09:24

Funktionelle Beurteilung der Intestinalpermeabilität und der neutrophilen transepithelialen Migration bei Mäusen mit einem standardisierten Darmschleifenmodell

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026