0 Aufrufe • 3:40 Min. • April 30th, 2023
- Die Erzeugung extrachromosomaler DNA-Arrays durch Mikroinjektion - die einfachste Methode zur Erzeugung transgener Wurmstämme - führt zu genetischen Elementen, die während der Zellteilung nicht stabil übertragen werden und daher variable Vererbungsraten und Expressionsniveaus aufweisen. Das Ziel der Integration des Arrays in ein Chromosom ist es, diese genetische Instabilität und Variabilität zu verringern.
Beginnen Sie dazu mit einer alterssynchronisierten Population von L4-transgenen Würmern, die ein extrachromosomales Array tragen, das zuvor durch Mikroinjektion eingeführt wurde, und es ihnen ermöglichen, zu trächtigen Erwachsenen heranzuwachsen. Setzen Sie diese erwachsenen Tiere auf neue Teller um und lassen Sie sie Eier legen, bis mindestens 30 Eier auf jedem Teller sind. Entferne die erwachsenen Tiere und lasse die Eier heranwachsen, bis sie das L4-Stadium erreicht haben. Bestrahlen Sie dann die Würmer mit UV-Licht. Dies führt zu zufälligen Doppelstrangbrüchen in der genomischen DNA, bei denen die DNA-Reparaturmaschinerie des Wurms das Array willkürlich einbauen kann.
Zählen Sie nach einer Erholungsphase über Nacht die Anzahl der überlebenden Würmer. Ein geringer Prozentsa
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