Assay zur Bildung von Weichagar-Kolonien: Eine Methode zum Testen der Auswirkungen neuartiger Verbindungen auf die Proliferation von Krebszellen

Nehmen Sie zunächst eine angemessene Konzentration geschmolzener Agarose in ein konisches Röhrchen und fügen Sie eine gewünschte Menge warmes Kulturmedium hinzu. Vorsichtig umkehren, um den Inhalt zu vermischen. Geben Sie diese Mischung in jede Vertiefung einer Sechs-Well-Platte und lassen Sie sie fest werden. Dies ist die unterste Schicht. Behandeln Sie anschließend Krebszellen mit der interessierenden Verbindung und fügen Sie die erforderliche Konzentration an Agarose hinzu.

Gießen Sie nun diese Mischung mit der gewünschten Anzahl von Zellen pro Milliliter in jede Vertiefung. Dabei handelt es sich um eine zellhaltige Schicht. Sobald das Medium fest geworden ist, inkubieren Sie die Platte eine Woche lang bei 37 Grad Celsius. Bereiten Sie eine Feederschicht vor, indem Sie Agarose mit dem Medium mischen und diese Mischung mit der interessierenden Verbindung ergänzen. Geben Sie diese Feeder-Schicht vorsichtig in jede Vertiefung, lassen Sie sie erstarren und inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad Celsius.

Wiederholen Sie diesen Fütterungsvorgang wöchentlich, um die Zellen mit dem Medium aufzufüllen, bis sich Kolonien bilden. Wenn die interessierende Verbindung ein Inhibitor der Tumorig