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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:20 Min. • April 30th, 2023
- Niederfrequente Ultraschallwellen führen zur selektiven Lyse menschlicher Leukämiezellen und der XTT-Assay hilft bei der Bestimmung des Ausmaßes dieser Schädigung. Der Assay funktioniert nach dem Prinzip, dass die mitochondrialen Enzyme gesunder Zellen einen gelben XTT-Farbstoff in eine orangefarbene Verbindung namens Formazan umwandeln. Zu Beginn des Assays behandeln Sie die Zellen mit Methyl-Beta-Cyclodextrin, einem cholesterinabbauenden Mittel, und beschallen Sie die Zellen anschließend mit geringer Leistung, um Zellschäden zu induzieren.
Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren, und fügen Sie dem Pellet frisches Zellwachstumsmedium hinzu. Säen Sie die Zellen in der gewünschten Konzentration in eine Multi-Well-Mikroplatte und inkubieren Sie sie über Nacht. Geben Sie nun die aktivierte XTT-Lösung in die Zellen und inkubieren Sie, bis sich die orange Farbe in den Vertiefungen der Mikroplatte entwickelt. Legen Sie die Platte in ein Spektralphotometer. Messen Sie die Extinktion bei 450 bis 500 Nanometern und dann bei 630 bis 690 Nanometern. Subtrahieren Sie die beiden Werte, um genaue Ergebnisse zu erhalten. Der höhere Wert der Absorption im XTT-Assay deutet auf eine höher
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