Bromodeoxyuridin-Pulsmarkierungsassay: Eine Technik zur Messung der Zellproliferation

- Beginnen Sie mit einer Leukämie-Zellsuspension, die die gewünschte Zelldichte enthält. Zentrifugieren und resuspendieren Sie die Zellen in einem Nährmedium, das Serum enthält. Die Serumzugabe fördert das kontinuierliche Zellwachstum und die Zellen bewegen sich durch die verschiedenen Zellzyklusphasen. Verdünnen Sie die Zellen in einer Bromodeoxyuridin- oder BrdU-Markierungslösung und züchten Sie sie unter physiologischen Bedingungen für die erforderliche Dauer.

Zellen in der Synthese oder S-Phase nehmen BrdU - ein Thymidin-Analogon - auf, das Thymidin während des DNA-Replikationsprozesses ersetzt. Zentrifugieren Sie die Zellen, um überschüssiges BrdU zu entfernen, und resuspendieren Sie die Zellen in einem geeigneten Medium. Übertragen Sie die Zellen auf eine Multi-Well-Platte. Lassen Sie die Zellen unter physiologischen Bedingungen für verschiedene Zeiträume wachsen.

Zu verschiedenen Zeiträumen durchlaufen die Zellen den Rest der S-, G2-, Mitose- und G1-Phase und treten in den nächsten Zellzyklus ein, was die Abschätzung der Zellproliferation ermöglicht. Führen Sie eine Antikörperfärbung durch, um BrdU mit Fluorochrom-Antikörpern zu markieren und die Zellproliferation mittels Du