Retroorbitale Blutentnahme: Eine Methode zur Isolierung mononukleärer Zellen aus dem retroorbitalen Sinus einer Maus

- Halten Sie zuerst eine betäubte Maus am Hals und strecken Sie das Auge hervor. Führen Sie ein feines Kapillarrohr in den medialen Canthus des Auges ein. Lassen Sie das Blut durch Kapillarwirkung in einen Schlauch fließen. Füllen Sie das Blut in ein EDTA-beschichtetes Röhrchen und halten Sie es auf Eis. EDTA bindet die Kalziumionen und verhindert so die Blutgerinnung. Eine niedrigere Temperatur reduziert die glykolytische Aktivität der Zellen und die Wahrscheinlichkeit einer mikrobiellen Kontamination.

Als nächstes verdünnen Sie das Blut mit einem EDTA-haltigen Puffer und mischen Sie es gut. Geben Sie vorsichtig eine Schicht einer geeigneten Trennlösung auf den Boden, ohne das Blut zu stören. Die Suspension zentrifugieren. Das Polymer in der Trennlösung aggregiert die roten Blutkörperchen und sedimentiert am Boden. Mononukleäre Zellen und Blutplättchen, die leichter als das Polymer sind, lagern sich oberhalb des polymeren Gradienten ab.

Entfernen Sie die oberste Schicht mit Plasma und sammeln Sie den undurchsichtigen weißen Ring mit den mononukleären Zellen. Verdünnen Sie die Zellen mit PBS und zentrifugieren Sie, um restliches Plasma und Blutplättchen zu entfernen. Verwenden Sie