JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:12 Min. • April 30th, 2023
- Die May-Grunwald Giemsa- oder MGG-Färbung ist ein zweistufiges Verfahren zur differentiellen Färbung von Knochenmarkzellen (BMCs). Um mit der Färbung zu beginnen, erhalten Sie einen konzentrierten einschichtigen Abstrich von BMCs auf einem Objektträger. Lassen Sie den Abstrich an der Luft trocknen. Behandeln Sie die Zellen zuerst mit May-Grunwald-Färbung, die Eosin und Methylenblau enthält, gelöst in Methanol
.Das Lösungsmittel Methanol fixiert die Zellen zunächst. Methylenblau, ein basischer Farbstoff mit einer positiven Nettoladung, färbt saure zelluläre Bestandteile wie Nukleinsäuren. Eosin, ein saurer Farbstoff mit einer negativen Nettoladung, färbt basische zelluläre Bestandteile wie zytoplasmatische kationische Proteine. Behandeln Sie die Zellen mit einer Pufferlösung mit einem pH-Wert von 6,8, damit der Farbstoff gut ausfallen und sich gut an die Zellmaterialien binden kann.
Behandeln Sie die Zellen zusätzlich mit Giemsa-Färbung, die auch saure und basische Farbstoffe enthält, um den Gesamtfärbeeffekt zu verstärken. Die basischen Farbstoffe, Azurblau und Methylenblau, verstärken die Färbung der sauren Komponenten, während der saure Farbstoff Eosin die Färbung der basischen Komponenten verstärkt.
Unter dem Mikroskop erscheinen die Erythrozyten rosa-braun und die Blutplättchen als kleine violette Punkte. Die Granulozyten weisen einen violett-blauen mehrlappigen Kern und rotes granuliertes Zytoplasma auf. Agranulozyten erscheinen klar blau mit einem großen violett-rosa Kern. Im folgenden Protokoll zeigen wir die MGG-Färbung von Knochenmarkzellen.
- Um die Knochenmarkzellen für die Färbung vorzubereiten, legen Sie zunächst Objektträger in Einwegkammern mit vorangebrachten Filterkarten und legen Sie die Kammern in eine Zytozentrifuge. Geben Sie 100 Mikroliter FACS-Puffer in jede Filterkartenkammer und zentrifugieren Sie die Objektträger kurz. Am Ende des Schleuderns gibst du 100 Mikroliter Zellen in jede Kammer und zentrifugierst die Zellen.
Nehmen Sie dann die Objektträger vorsichtig aus den Kammern, um sie an der Luft zu trocknen. Um die Knochenmarkzellen zu färben, tauchen Sie die Objektträger 5 Minuten lang in ein Coplin-Glas mit May-Grunwald-Lösung. Übertragen Sie anschließend die Objektträger 1 Minute lang in ein Glas mit Pufferlösung mit einem pH-Wert von 6,8. Übertragen Sie dann die Objektträger für 10 Minuten in die Giemsa R-Lösung, gefolgt von einer 10-sekündigen Wäsche mit pH-neutralem Wasser.
Lassen Sie die Objektträger nach dem Waschen an der Luft trocknen und tragen Sie einen Tropfen Eindeckmedium auf jede Probe auf. Setzen Sie dann eine Kante eines Deckglases auf den Objektträger und senken Sie das Deckglas vorsichtig auf die Zellen ab, indem Sie leicht drücken, um Luftblasen zu entfernen.