Präparation subzellulärer Fraktionen aus leukämischen Zellen: Eine Methode zur Erzeugung zellulärer und nukleärer Fraktionen aus leukämischen Zellen

- In leukämischen Zellen ist das Pendeln von Makromolekülen, wie z. B. einigen tumorunterdrückenden Proteinen, zwischen dem Zellkern und dem Zytoplasma dereguliert. Die Fehllokalisierung dieser Proteine macht sie inaktiv, was zu einem unkontrollierten Wachstum von Leukämiezellen führt. Wir können die abweichende Position solcher Proteine bestimmen, indem wir die zytoplasmatische und nukleäre Fraktion aus leukämischen Zellen erzeugen.

Beginnen Sie damit, das gewünschte Volumen an leukämischen Zellen in ein Mikrofuge-Röhrchen zu geben und zu zentrifugieren, um die Zelle zu pelletieren. Suspendieren Sie das Pellet erneut in einem hypotonen Lysepuffer und fügen Sie dann die gewünschte Konzentration des Reinigungsmittels hinzu. Der hypotone Lysepuffer bewirkt, dass die Zellen anschwellen und die Plasmamembran aufbrechen, wobei die Kernmembran intakt bleibt und so die zytoplasmatischen Fraktionen isoliert werden. Das Detergens hilft bei der Extraktion von Proteinen aus zytoplasmatischen Organellen.

Die lysierten Zellen werden in Suspension zentrifugiert und der Überstand in ein frisches Röhrchen überführt. Der Überstand enthält die zytoplasmatische Fraktion der Zelle. Zur Vorbereitung de