JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:57 Min. • April 30th, 2023
- Transkriptionsfaktoren sind Proteine, die an eine bestimmte Stelle auf der DNA binden, um die Genexpression zu regulieren. Fehler in den Transkriptionsfaktoren verändern diese Aktivität und führen zu einer Überexpression von Genen, die Krebs verursacht. Um die Rolle von Transkriptionsfaktoren und der Genregulation zu verstehen, können wir einen Chromatin-Immunpräzipitationsassay oder CHIP durchführen, und die Chromatinscherung ist ein wichtiger Schritt im CHIP-Arbeitsablauf.
Für die Chromatinscherung stabilisieren Sie den DNA-Protein-Komplex durch Zugabe von Formaldehyd. Formaldehyd vernetzt Proteine mit der zugehörigen DNA-Sequenz, indem es kovalente Bindungen bildet. Als nächstes wird ein geeigneter Lysepuffer verwendet, um die Zellen zu lysieren, um Chromatin freizusetzen, das die vernetzten DNA-Protein-Komplexe enthält, und Zentrifuge. Scheren Sie das Chromatin mit einem Mikrokokken-Nuklease-Enzym. Dieses Enzym spaltet das Chromatin zwischen den Nukleosomen und verdaut die losen DNA-Enden. Die Mischung zentrifugieren und den Überstand auffangen.
Laden Sie den Überstand auf FSME-Agarosegel, um die geeignete Größe der DNA-Fragmente zu analysieren. Legt ein elektrisches Feld übe
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