JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 6:29 Min. • April 30th, 2023
- Die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) ist eine Technik zur Bestimmung von Protein-DNA-Wechselwirkungen in Zellen. Proteine binden an bestimmte Stellen auf der DNA und regulieren die Genexpression. Zuerst wird der DNA-Protein-Komplex mit Formaldehyd stabilisiert. Formaldehyd vernetzt Proteine mit der zugehörigen DNA-Sequenz, indem es kovalente Bindungen bildet.
Als nächstes wird ein geeigneter Lysepuffer verwendet, um die Zellen so zu lysieren, dass Chromatin freigesetzt wird, das die vernetzten DNA-Protein-Komplexe enthält. Die Suspension wird zentrifugiert und der Überstand wird beschallt, um Chromatinfragmente zu erhalten. Anschließend markieren Sie die Probe mit einem geeigneten Antikörper, der spezifisch an das DNA-gebundene Protein bindet.
Fügen Sie der Probe spezielle magnetische Kügelchen hinzu. Das Kügelchen erkennt den Antikörper und bindet an ihn. Verwenden Sie einen Magneten, um die magnetischen Kügelchen mit dem Antikörper-Protein-DNA-Komplex zu sammeln. Waschen Sie die Probe, um ungebundenes Chromatin oder Antikörper zu entfernen. Fügen Sie dem Komplex einen Puffer mit hoher Salzkonzentration hinzu und inkubieren Sie ihn bei höheren Temperaturen, um die DNA-Protein
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos