Kultivierung und Ernte von HSPC-Klonen: Eine Methode zur Gewinnung der einzeln sortierten HSPC-Klone

- Hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen oder HSPC, können sich selbst erneuern und in verschiedene Arten von Blutzellen differenzieren. HSPCs häufen im Laufe des Lebens nach und nach DNA-Mutationen an, die zu Leukämie beitragen können. Um solche Mutationen zu analysieren, werden HSPCs in der Regel aus dem Knochenmark erzeugt.

Beginnen Sie damit, mononukleäre Zellen - adulte Stammzellen, die aus dem Knochenmark isoliert wurden - mit Fluorophor-konjugierten Antikörpern zu versorgen und sie für die gewünschte Dauer zu inkubieren. Die Antikörper binden an spezifische Zelloberflächenmarker wie CD34. Laden Sie nun die Mischung in das fluoreszenzaktivierte Zellzytometrie- oder FACS-Gerät.

Die Fluorophor-konjugierten Antikörper fluoreszieren, wenn sie vom Laser getroffen werden. Einzelne Zelltröpfchen passieren den Detektor, der die Fluoreszenzintensität misst, auf deren Grundlage der Tropfen eine elektrische Ladung besitzt. In Gegenwart von elektromagnetischen Feldern wandern positiv geladene Zellen in den negativen Behälter und umgekehrt.

Züchten Sie nun die FACS-sortierten CD34-positiven HSPCs in einem geeigneten Medium für die gewünschte Dauer, bis Klone sichtbar sind. Als nächste