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Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:59 Min. • April 30th, 2023
- Retroviren sind RNA-Viren, die sich mithilfe der reversen Transkriptase vermehren, um ihr RNA-Genom in doppelsträngige DNA umzuwandeln und sich dauerhaft in das Wirtsgenom zu integrieren. Neue Viruspartikel verlassen die Zelle und können andere Zellen infizieren. Bei der Krebsgentherapie werden retrovirale Vektoren eingesetzt, um therapeutische Gene über eine Technik namens Transduktion in Zielzellen einzuführen, um das mutierte Gen herunterzuregulieren oder Zellen zu eliminieren.
Um retrovirale Vektoren mit hohem Titer zu erhalten, transfizieren Sie die HEK 293-Zellen mit einem Transfektionsgemisch, das das gewünschte retrovirale Plasmid, das Verpackungsplasmid und ein geeignetes Transfizierungsmittel enthält. Inkubieren Sie die Zellen. Das Transfiktionsmittel erleichtert die Abgabe beider Plasmide in die Zellen.
Das retrovirale Plasmid kodiert das virale Genom mit dem Zielgen, während das Verpackungsplasmid für die viralen Hüllproteine kodiert. Die zelluläre Maschinerie der Verpackungszellen bildet retrovirale Partikel und gibt sie an das Medium ab. Sammeln Sie den Virusüberstand und zentrifugieren Sie, um Zellen zu entfernen.
Übertragen Sie die gewünschte Konzentration von Vir
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