Extrazellulärer Purinstoffwechsel: Ein HPLC-basierter Assay zur Messung der Adenosinbildung und des Metabolismus in leukämischen Zellen

- Adenosin, ein Purinnukleosid, das in nominalen Konzentrationen im extrazellulären Raum vorkommt, hilft, die Zellproliferation unter physiologischen Bedingungen zu kontrollieren. Bei pathologischen Zuständen wie Leukämie steigt die extrazelluläre Adenosinkonzentration an und hemmt die Immunantwort gegen Krebszellen. Die Adenosinakkumulation resultiert entweder aus der Dephosphorylierung von ATP- oder ADP-Nukleotiden oder aus einem gestörten Abbau von Adenosin zu Inosinnukleosid.

Um die Adenosinbildung und den Adenosinverbrauch zu messen, kultivieren Sie Krebszellen in Gegenwart eines Nukleotidsubstrats. Die Adenosin-Stoffwechselaktivität der Zellen bestimmt die Konzentrationen verschiedener Purinmoleküle, die in der Kultur vorhanden sind. Zentrifuge, um die Zellen zu entfernen und Purinmoleküle im Überstand zu erhalten.

Um Purine zu trennen und zu quantifizieren, füllen Sie die Probe in geeignete Fläschchen um. Laden Sie sie in eine Umkehrphase, Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder RP-HPLC-Säule, die eine stationäre Phase enthält, die mit hydrophoben Liganden immobilisiert ist. Während des Passierens der Säule adsorbieren hydrophobe Moleküle an die Liganden und werden auf