Side Population Assay: Eine Methode zur Isolierung der Seitenpopulation von Tumorzellen aus Zebrafischen

- Die chemotherapeutische Behandlung von Tumoren zielt in der Regel auf stark proliferative Zellen ab, wobei eine kleine Untergruppe der Stammzellpopulation zurückbleibt, was zur Rekapitulation des Tumors führt. Diese Stammzellen werden als Seitenpopulation bezeichnet. Da der Seitenpopulation spezifische Zellmarker fehlen, verwenden wir einen Farbstoff-Efflux-Assay, um sie aus anderen Tumorzellen zu isolieren.

Geben Sie zunächst Hoechst-Farbstoff zu den isolierten Zebrafisch-Tumorzellen. Hoechst dringt in den Zellkern ein und bindet an die A-T-reiche Region in der kleinen Furche der DNA. Die Seitenpopulation der Zellen weist eine höhere Konzentration an ABC-Transportern auf der Oberfläche auf, was zu einem schnellen Ausfluss des Farbstoffs außerhalb der Zelle führt und eine geringe Fluoreszenz aufweist.

Nehmen Sie ein weiteres Fläschchen mit Hoesct-behandelten Tumorzellen und fügen Sie Verapamil hinzu. Dieses Fläschchen dient als Kontrolle, da Verapamil die ABC-Transporter blockiert, was zu einer Verringerung des Hoechst-Efflux und damit zu einer Erhöhung der Fluoreszenz in der Seitenpopulation führt.

Inkubieren Sie sowohl die Kontroll- als auch die Probenzelle im Dunkeln. Als näch