JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:09 Min. • April 30th, 2023
- Ionisierende Strahlung induziert verschiedene Arten von DNA-Schäden, wie z. B. einzelsträngige Brüche oder SSBs und doppelsträngige Brüche oder DSBs. Einzelstrangbrüche oder SSBs treten auf, wenn die Strahlung die Basen schädigt und das DNA-Rückgrat spaltet, während Doppelstrangbrüche (DSBs) entstehen, wenn zwei SSBs auf gegenüberliegenden DNA-Strängen auftreten. Der erste Schritt der DSB-Bildung ist die Phosphorylierung des H2AX-Histons, die durch Immunfluoreszenzfärbung sichtbar gemacht werden kann.
Um eine Immunfluoreszenzfärbung durchzuführen, fügen Sie einer Probe, die auf einem Deckglas in einer Petrischale befestigt ist, Primärantikörper hinzu. Die Antikörper binden an das phosphorylierte Histonprotein gamma-H2AX. Inkubieren Sie die Probe und waschen Sie sie mit PBS, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Fügen Sie als Nächstes sekundäre Antikörper hinzu, die Fluorophore tragen, die primäre Antikörper erkennen und an diese binden. Fügen Sie die gewünschte Menge DAPI-Fluoreszenzfärbung hinzu, um die Zellkerne gegenzufärben.
Montieren Sie den Deckglas vorsichtig mit einem Eindeckmedium auf einen Objektträger und betrachten Sie die Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop. Di
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