ROS-Detektion mit DCFH-DA-Färbung: Messung der Gesamt-ROS in kolorektalen Krebszelllinien

- Reaktive Sauerstoffspezies werden überwiegend aus Mitochondrien produziert, wenn Elektronen aus der Elektronentransportkette austreten. Diese Elektronen verbinden sich mit molekularem Sauerstoff, wodurch verschiedene reaktive Sauerstoffspezies (ROS) entstehen. In Krebszellen kommt es zu einer Überproduktion von reaktiven Sauerstoffspezies. Diese hochreaktiven ROS-Moleküle können Membranen, Proteine und DNA im Zellinneren oxidativ schädigen.

Erhöhte ROS-Spiegel schädigen die DNA, was zur Aktivierung eines onkogenen Signalwegs führt, der das Fortschreiten der Krebserkrankung verursacht. Daher ist es wichtig, den Gehalt an reaktiven Sauerstoffspezies zu ermitteln, die von den Krebszellen produziert werden.

Beginnen Sie mit der Entnahme von Krebszellen aus menschlichem Darmkrebs in einem geeigneten Nährmedium. Als nächstes säen Sie diese Zellen auf eine Multi-Well-Platte und fügen Sie DCFH-DA-Lösung hinzu. Inkubieren Sie die Platte für die gewünschte Dauer. DCFH-DA durchdringt die Zellmembran. Sobald es sich in der Zelle befindet, wandelt sich DCFH-DA in Gegenwart eines zellulären Esterase-Enzyms in DCFH um. Darüber hinaus ergeben sich bei der Oxidation von DCFH durch reaktive Sauers