JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:24 Min. • April 30th, 2023
- Mikrometastasen sind eine kleine Gruppe von Krebszellen, die sich von einem Primärtumor abstoßen und sich über Blut- oder Lymphknoten in verschiedene Teile des Körpers ausbreiten. Um Mikrometastasen zu erkennen, suspendieren Sie Darmkrebs-Organoidzellen in PBS, um den pH-Wert aufrechtzuerhalten, und laden Sie die Zellsuspension in eine Spritze. Legen Sie anschließend eine betäubte Maus in Bauchlage auf eine Operationsliege. Machen Sie mit einer Schere einen kleinen Schnitt am unteren Teil der linken Flanke und legen Sie die Milz frei. Ziehen Sie die Milz vorsichtig mit einer Pinzette heraus und injizieren Sie die Zellsuspension langsam in die Milz. Verschließen Sie den Schnitt mit Nähten und bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück. Überwachen Sie es, bis es sich erholt hat.
Nach der gewünschten Injektionszeit opfern Sie die Maus, um Primärtumore und verschiedene Gewebe zu präparieren. Betrachten Sie präpariertes Gewebe unter einem Fluoreszenzmikroskop. GFP-exprimierende Krebszellen entwickeln einen Primärtumor an der injizierten Stelle in der Milz. Einige Krebszellen aus dem Primärtumor wandern in ein anderes Organ, in der Regel die Leber, um mikrometastasierende Kolonien zu bilden. Im folgenden Protokoll werden wir ein experimentelles Metastasen-Mausmodell von GFP-exprimierenden Darmkrebs-Organoidzellen etablieren.
- Um ein experimentelles Metastasenmodell von Tumor-Xenotransplantaten von Darmkrebspatienten zu etablieren, verdünnen Sie die einzelnen Tumorzellsuspensionen in einer Konzentration von 4 mal 10 bis zu den vierten Zellen pro 50 Mikroliter und laden Sie 50 Mikroliter Zellen pro Maus in eine Spritze, die mit einer 22-Gauge-Nadel ausgestattet ist. Platzieren Sie die erste anästhesierte NOG-Maus in Bauchlage auf der Bank und machen Sie einen kleinen Schnitt im unteren Bereich der linken Flanke.
Verwenden Sie eine sterile Schere und Pinzette, um das Bauchfell vorsichtig zu durchtrennen und die Milz freizulegen, und verwenden Sie die Pinzette, um das an der Milz haftende Fett zu greifen. Injizieren Sie dann langsam 50 Mikroliter der Tumorzellsuspension in die Milz und achten Sie darauf, dass keine Leckage beobachtet wird.
Nachdem alle Mäuse injiziert und bei Bedarf genäht wurden, bringen Sie die Tiere in ihre Heimatkäfige zurück und prüfen Sie einen Tag nach der Abgabe der Tumorzellen auf Nahtlecks und Lebensfähigkeit. Verwenden Sie Messschieber, um die Tumoren wöchentlich zu messen, und entnehmen Sie die Primärtumoren und relevanten Gewebe bis zu den entsprechenden experimentellen Endpunkten. Übertragen Sie die präparierten Tumoren und Organe in 5 Milliliter eiskaltes PBS in einer 10 Zentimeter großen Petrischale auf Eis und beobachten Sie das präparierte Gewebe unter einem Stereofluoreszenzmikroskop, um ihre GFP-Expression zu beurteilen.