Segmentale Adeno-Cre-Infektion: Eine Technik zur Erzeugung von isoliertem Darmkrebs unter Verwendung gentechnisch veränderter Mausmodelle

- Beginnen Sie mit der Entnahme einer anästhesierten bedingt mutierten Maus mit einem modifizierten Genom, das spezifische Cre-Rekombinase-Enzymerkennungssequenzen, sogenannte LoxP-Inserts, trägt, die das gewünschte Tumorsuppressorgen flankieren, das mutiert werden soll. Legen Sie die Bauchhöhle chirurgisch frei. Lokalisieren Sie den distalen Dickdarm und klemmen Sie seinen oberen Teil ein. Führen Sie transanal einen medizinischen Schlauch ein und schieben Sie ihn in den distalen Dickdarm vor. Spülen Sie den Dickdarm mit Kochsalzlösung, um alle Fäkalien zu entfernen. Setze den Schlauch wieder ein. Klemmen Sie den unteren Bereich des Doppelpunkts für die Segmentierung ein. Blasen Sie das Segment mit einer geeigneten Zelldissoziationslösung auf. Dadurch wird die Schleimhautbarriere perforiert und die Zugänglichkeit der Darmkryptenzellen erhöht. Spülen Sie die Dissoziationslösung aus.

Als nächstes injizieren Sie eine adenovirale Suspension in das Dickdarmsegment. Diese manipulierten viralen Vektoren kodieren für Cre-Rekombinase-Enzyme. Das Virus dringt in die Zelle ein, gibt seine DNA in den Zellkern ab und exprimiert die Enzyme. Die Proteine erkennen die LoxP-Insertionen im Wirtsgeno