JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:28 Min. • April 30th, 2023
- Tau ist ein Mikrotubuli-assoziiertes Protein, das an der Stabilisierung und dem Zusammenbau der Mikrotubuli beteiligt ist. Viele Krebszellen exprimieren hyperphosphoryliertes Tau-Protein, das keine gut organisierte Mikrotubuli-Bindung aufrechterhält. Um die Wechselwirkung zwischen Tau-Protein und Mikrotubuli zu untersuchen, geben Sie Krebszelllysat, das Tau-Protein enthält, und eine Mikrotubuli-Arbeitslösung in ein Mikrofuge-Röhrchen.
Die im Zelllysat vorhandenen nicht-phosphorylierten Tau-Proteine binden an die Mikrotubuli. Geben Sie nun die gewünschte Menge PEM-Puffer in das Röhrchen, um die Aktivität von Tubulin zu stabilisieren, einem Protein, das zu Filamenten polymerisiert und Mikrotubuli bildet. Inkubieren Sie die Mischung für die gewünschte Dauer.
Zentrifugieren Sie die Mischung, um das an Mikrotubuli gebundene Protein zu pelletieren. Das ungebundene Protein verbleibt im Überstand. Den Überstand in ein frisches Rohr umfüllen und das Pellet in einem geeigneten Puffer wieder suspendieren. Fügen Sie der resuspendierten Pelletsuspension einen Gelladepuffer hinzu und lassen Sie die Proben auf einem Polyacrylamidgel laufen, um das mikrotubuligebundene Protein und den Elektroblo
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