Patienten-abgeleitete Xenotransplantat-Modellierung: Eine Technik zur Generierung von Melanom-Mausmodellen

- In patienteneigenen Xenotransplantat- oder PDX-Modellen werden Tumorzellen oder Fragmente von menschlichen Patienten in immundefiziente Empfängermäuse implantiert. PDX-Modelle simulieren die biologischen und molekularen Eigenschaften der Mikroumgebung des menschlichen Tumors. Um ein Melanom-PDX-Modell zu entwickeln, wird zunächst Tumorgewebe von einem Melanompatienten entnommen. Entfernen Sie das nekrotische Gewebe aus dem Tumor. Zerkleinern Sie den Tumor, um eine Aufschlämmung zu erhalten. Bereiten Sie als Nächstes eine anästhesierte Empfängermaus in Bauchlage vor. Machen Sie einen kleinen chirurgischen Schnitt an der Rückenhaut. Schneiden Sie vorsichtig die Faszienmembran oder die Schicht aus losem Bindegewebe direkt unter der Haut ab. Dies trennt die Haut von den darunter liegenden Muskelschichten und hilft, eine Tasche für die Tumorimplantation zu schaffen.

Übertragen Sie den Tumorschlamm vorsichtig in die Tasche. Verabreichen Sie nun eine künstliche extrazelluläre Matrix in die Tasche, um die implantierten Tumorzellen zu stabilisieren und zu sichern. Heften Sie die Wunde chirurgisch an und lassen Sie die Maus sich erholen. Überwachen Sie die Empfängermaus wöchentlich, um das Wachstum des Xenotransplantattumors zu beobachten. Im folgenden Protokoll werden wir die subkutane Implantation von patienteneigenen Melanomtumorzellen in eine immundefiziente NSG-Maus demonstrieren, um von Melanompatienten stammende Xenotransplantatmodelle zu generieren.

- Um chirurgisches Exzisions- oder chirurgisches Biopsiegewebe zu implantieren, rasieren Sie zunächst Haare vom unteren Rücken von NSG-anästhesierten Mäusen im Alter von sechs bis acht Wochen und lassen Sie einen etwa 1,5 bis 3 Zentimeter großen Bereich ohne Haare. Bereiten Sie Tumorbrocken vor und teilen Sie die Tumoraufschlämmung in einer Petrischale in einzelne Hügel für die chirurgische Implantation. Machen Sie mit einer Skalpellklinge einen etwa 5 Millimeter langen Schnitt in der Mitte des Rückens der Maus. Heben Sie mit einer Pinzette die Haut an der Seite des Schnitts an, die dem Bediener gegenüberliegt. Trennen Sie mit der Schere in der anderen Hand die Haut von der Muskelschicht, indem Sie die Faszienmembran mit kleinen Scherenschnitten sanft durchtrennen und so eine Tasche für das Tumorgewebe schaffen.

Nehmen Sie mit einer Skalpellklinge einen Tumorbrocken sowie einen einzelnen Hügel Tumorschlammgewebe auf und legen Sie das Gewebe vorsichtig in die entstandene Tasche. Geben Sie dann 100 Mikroliter künstliche extrazelluläre Matrix auf den Tumorgewebehügel in der Tasche. Ziehe den Schnitt mit zwei Pinzetten an beiden Enden nach oben, so dass die Wundränder nahe beieinander liegen. Bringen Sie dann ein oder zwei gewickelte Clips an, um die Wunde zu schließen. Injizieren Sie subkutan 1-5 Milligramm pro Kilogramm Analgetikum. Wenn die Heilung abgeschlossen ist, nach ca. 7 Tagen, entfernen Sie die Wundclips.