Hanging Drop Method: Eine Technik zur Erzeugung von 3D-Melanom-Sphäroiden

- Sphäroide sind dreidimensionale In-vitro-Zellkulturmodelle, die die In-vivo-Tumorarchitektur nachahmen und bei der Untersuchung intratumoraler Interaktionen helfen. Um die Kultur einzurichten, bereiten Sie zunächst eine einzellige Suspension von Melanomzellen in dem entsprechenden Medium vor. Als nächstes werden kleine Volumina dieser Zellsuspension in ausreichendem Abstand auf die Innenfläche des Deckels einer sterilen, nicht adhäsiven Kulturschale aufgetappt. Drehen Sie den Deckel vorsichtig um und setzen Sie ihn auf den Boden der Kulturschale mit PBS, um eine Hydratationskammer zu schaffen. Inkubieren Sie die Platte unter geeigneten Bedingungen.

Die Feuchtigkeit von PBS verhindert die Verdunstung von Medien aus den hängenden Tropfen. Frischen Sie die Tropfen auf, indem Sie einige Mikroliter des Mediums austauschen. Aufgrund der Oberflächenspannung behalten die Tröpfchen ihre kugelförmige Form bei und bleiben an der Innenfläche der Platte hängen. Gravitationskräfte ermöglichen es den Zellen, in der Schwebe zu bleiben, ohne sich auszubreiten, sondern sich in den Tröpfchen zu dreidimensionalen Sphäroiden zu aggregieren. Spülen Sie abschließend die Tröpfchen mit PBS, um die Sphäro