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Krebsforschung
0 Aufrufe • 6:00 Min. • April 30th, 2023
- HCR-FISH oder Hybridisierungskettenreaktion-Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung weist virale Nukleinsäuresequenzen im Genom virusinfizierter Zellen nach. Befestigen Sie zunächst eine adhärente Kultur von virusinfizierten Zellen und permeablizieren Sie deren Zellmembran. Inkubieren Sie die Zellen mit einem Hybridisierungspuffer, um Hintergrundsignale zu reduzieren. Behandeln Sie die Zellen mit Initiatorsonden, die eine HCR-Initiatorsequenz und eine komplementäre Sequenz enthalten, die auf die virale DNA abzielt. Erhitzen Sie die Probe, um die doppelsträngige DNA des Wirts zu einer einzelsträngigen DNA zu denaturieren. Inkubieren Sie die Probe, damit die Sonde an ihre komplementäre virale Ziel-DNA-Sequenz binden kann.
Als nächstes wird die Behandlung mit einem Amplifikationspuffer durchgeführt, der zwei Sätze fluoreszenzmarkierter Oligonukleotid-Hairpin-Sonden, H1 und H2, enthält. Inkubieren, um die Hybridisierungskettenreaktion zu erleichtern. Die ungepaarte Initiatorsequenz bindet an ihren komplementären H1-Schwanz, wodurch die Haarnadelstruktur linearisiert wird. Die exponierte H1-Sequenz bindet in ähnlicher Weise an ihren komplementären H2-Schwanz. Das nachfolgende H2 bindet wei
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