Chemisch induziertes zweistufiges Modell der Hautkarzinogenese: Ein experimentelles In vivo Mausmodell für Hautkrebs

- In experimentellen Krebsmausmodellen ähnelt der induzierte Krebs beim Tier dem menschlichen Krebs im Phänotyp. Sie bieten eine effiziente Plattform, um die Wirksamkeit potenzieller Therapien zu bewerten. Um ein zweistufiges Hautkarzinogenesemodell zu induzieren, bereiten Sie zunächst eine immungeschwächte anästhesierte Maus in Bauchlage vor. Rasieren Sie das Fell, um die darunter liegende Haut freizulegen. Tragen Sie im ersten Schritt ein starkes tumorauslösendes Mittel auf die freiliegende Rückenhaut auf.

Diese Haarfollikel beherbergen in ihrer Ruhe- oder Telogenphase inaktive Talgdrüsen. Der daraus resultierende Mangel an Talgfluss ermöglicht die Ansammlung der Verbindung in diesen Haarfollikeln. Die Verbindung diffundiert in die umgebenden Zellen und induziert eine Mutation des Zielgens, hauptsächlich in den Haarfollikel-Stammzellen oder primären Keratinozyten-Stammzellen. Die veränderte Genexpression bewirkt in diesen Zellen die Tumorinitiierung.

Im zweiten Schritt tragen Sie in den gewünschten Zeitabständen wiederholt ein geeignetes tumorwachstumsförderndes Mittel auf die Rückenhaut auf. Die Chemikalie stimuliert die Expansion der initiierten Zellpopulation. Die fortgesetzte Zellproliferation führt zur Bildung von krebserregenden Auswüchsen, den sogenannten Papillomen.

Im folgenden Protokoll zeigen wir die Generierung eines zweistufigen Mausmodells für die Hautkarzinogenese unter Verwendung der Chemikalien DMBA, einem Mutagen, und TPA, einem wachstumsfördernden Wirkstoff.

- Halten Sie vor Beginn des Experiments alle aggressiven 7 bis 9 Wochen alten Mäuse in separaten Käfigen, um Kämpfe und Hautläsionen zu vermeiden. Für die Hautpapillom-Induktion rasieren Sie zunächst die Rückenhaut der Versuchstiere und wiegen die Mäuse einzeln. Achtundvierzig Stunden nach der Rasur tragen Sie mit einer Pipette 50 Mikrogramm DMBA in 200 Mikrolitern Aceton auf den rasierten Bereich jeder narkotisierten Maus auf.

Behandeln Sie die Haut sieben Tage nach der DMBA-Anwendung sieben Tage nach der DMBA-Anwendung zweimal pro Woche bis zum Ende des Experiments mit 5 Mikrogramm TPA in 200 Mikrolitern Aceton. Untersuchen Sie die Tiere auf Papillome und fotografieren und notieren Sie jede Woche die Größe jedes einzelnen Papilloms auf einer Karte.

Eine tastbare Masse mit einem Durchmesser von mehr als 1 Millimeter gilt als Papillom, wenn sie länger als eine Woche anhält.