Schnelle Kultivierung primärer melanischer Melanozyten und Fibroblasten: Isolierung von Melanozyten und Fibroblasten aus einer ganzen Maushautprobe

- Die Haut besteht aus verschiedenen Zellen, die ihre verschiedenen Schichten bevölkern. Melanozyten, die Melanin-produzierenden Zellen, lokalisieren sich an der epidermal-dermalen Verbindung, während sich die Fibroblasten, die bindegewebsbildenden Zellen, in der Dermis befinden.

Um Melanozyten und Fibroblasten schnell zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme des Rüssels eines euthanasierten Mausjungen. Schneiden Sie die Haut ventral durch die Länge des Rumpfes. Schälen Sie die Haut, die die epidermale und dermale Schicht enthält, und zerkleinern Sie das Gewebe in kleine Stücke.

Behandeln Sie nun mit einem Verdauungspuffer, der Trypsin- und Kollagenase-Enzyme enthält, die die extrazelluläre Matrix abbauen und die Zellen in Suspension bringen. Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren, und entsorgen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in Melanozytenmedien und überführen Sie die Suspension in eine Multiwell-Platte.

Während der Kultur haften die meisten Fibroblasten am Vertiefungsboden, während die Melanozyten und andere Epidermiszellen in Suspension bleiben. Aspirieren Sie die suspendierten Zellen und fügen Sie der Fibroblastenkultur fibroblastenspezifische Med