JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:45 Min. • April 30th, 2023
- Transkriptionsfaktoren sind Proteine, die DNA-Bindungsdomänen enthalten. Sie binden an spezifische DNA-Sequenzen und helfen, die Genexpression in Zellen zu regulieren. Um die Expression von Transkriptionsfaktoren in schuppenassoziierten Melanozyten nachzuweisen, werden zunächst dunkel pigmentierte Rückenschuppen von einem anästhesierten Zebrafisch entnommen. Fixieren Sie die Schuppen und behandeln Sie sie mit einer Permeabilisierungslösung, um die einzelnen Melanozyten durchlässig zu machen.
Mit einer Bleichlösung behandeln, um das dunkle Melaninpigmentgranulat aus den Zellen zu entfernen. Durch diesen Bleichprozess wird die Wahrscheinlichkeit von pigmentassoziierten Hintergrundsignalen während der nachfolgenden Färbeschritte eliminiert. Inkubieren Sie mit einer Blockierungslösung, die Proteine enthält, um unspezifische Proteinbindungsstellen auf der Zelloberfläche zu blockieren.
Behandeln Sie nun die Probe mit den gewünschten Primärantikörpern. Diese Antikörper binden an ihre Zieltranskriptionsfaktoren in den Zellen. Markieren Sie anschließend die Probe mit fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörpern, die für die Primärantikörper spezifisch sind. Behandeln Sie die Probe zusätzlich
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