Tumorzellinvasions-Assay: Eine native 3D-Matrix-basierte 3D-In-vitro-Methode zur Beurteilung von Epithel-mesenchymalen Zellinteraktionen

- Um den Assay zu starten, pipettieren Sie zunächst eine mit Ascorbinsäure ergänzte Fibroblasten-Zellsuspension in eine Well-Platte und inkubieren Sie. Ascorbinsäure erhöht die Proliferation von Fibroblasten. Es stimuliert auch die Sekretion von nativen EZM-Bestandteilen, wodurch die proliferierenden Zellen in die dicke extrazelluläre Matrix eingebettet werden.

Lösen Sie die Matrize vorsichtig von der Plattenoberfläche und lassen Sie sie im Medium schwimmen. Die Matrix zieht sich zusammen und wird dicker, je mehr sich die Matrix ablagert und umbaut, wodurch ein Gewebe entsteht, das der nativen Dermis ähnelt. Verteilen Sie die Matrix auf einem porösen Netz. Als nächstes säen Sie die Epithelkrebszellen über die Matrix und inkubieren, damit sich die Zellen absetzen und anheften können.

Übertragen Sie die Baugruppe auf eine in einer Schale vormontierte Netzplattform. Fügen Sie Medien hinzu, um nur die untere Schicht der Matrix zu ergänzen und eine Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche für die darüber liegenden Zellen zu erzeugen. Während der Kultur fördert die Grenzfläche die Proliferation und Differenzierung von Tumorzellen. Die Zellen sezernieren auch Proteasen, die die EZM abbauen und so ih