Quantitative Polymerase-Kettenreaktion zur Aufzählung von Bakteriophagen

Bereiten Sie die qPCR-Vormischung für 10 biopanierte Phagenproben mit unbekannter Konzentration und 7 Proben mit Standardkonzentrationen in dreifacher Ausfertigung vor, was zu einer Vormischung für 51 Proben führt, die 255 Mikroliter qPCR-Mastermix, 51 Mikroliter Primer und 102 Mikroliter Wasser enthalten.

Aliquotieren Sie 8 Mikroliter der vorbereiteten PCR-Mischung in 51 Vertiefungen einer 96-Well-qPCR-Platte. Geben Sie als Nächstes zwei Mikroliter wärmebehandelter T7-Phagenproben in jede dieser Vertiefungen und geben Sie sie unter der Oberfläche der qPCR-Vormischung ab. Versiegeln Sie die Platte mit Klebefolie.

Wickeln Sie die Platte in Aluminiumfolie ein, um das Fluoreszenz-Photobleichen zu minimieren, und fahren Sie dann mit dem Ausführen der Platte auf dem qPCR-Gerät fort. Richten Sie die Zyklusbedingungen und die Einstellungen für die Schmelzkurve ein, wie im Textprotokoll beschrieben.