Intravitale Fluoreszenzmikroskopie zur Untersuchung der mikrovaskulären Thrombusbildung

Die Intravital-Fluoreszenzmikroskopie ist nützlich, um die phototoxische Induktion der Bildung eines Thrombus – eines Blutgerinnsels – an einer mikrovaskulären Verletzungsstelle zu untersuchen.

Beginnen Sie damit, eine betäubte, haarlose Maus zu nehmen, die mit einem phototoxischen Fluorophor-markierten Polysaccharid injiziert wurde. Platzieren Sie die Maus in Bauchlage auf einer Heizplattform, um die physiologische Temperatur für eine gute Durchblutung aufrechtzuerhalten.

Platzieren Sie den apikalen Teil des Ohres unter einem Intravital-Fluoreszenzmikroskop. Bei Anregung mit Licht emittiert das Fluorophor Fluoreszenz und ermöglicht so die Überwachung des mikrovaskulären Blutflusses. Erhöhen Sie die Lichtintensität, um die Thrombusbildung zu induzieren.

Das Fluorophor absorbiert das hochintensive Licht und reagiert mit molekularem Sauerstoff, um reaktive Sauerstoffspezies zu erzeugen. Diese Moleküle verursachen oxidativen Stress in den Endothelzellen, was zu Zellschäden und der Freilegung der subendothelialen Matrix führt.

Die geschädigten Zellen setzen thrombotische Mediatoren frei, die das freiliegende Kollagen in der subendothelialen Matrix und die zirkulierenden Blutplättchen überbrücken, die über spezifische Rezeptoren an die Mediatoren binden.

Die Bindung aktiviert die Blutplättchen, wodurch Effektormoleküle freigesetzt werden, die andere zirkulierende Blutplättchen aktivieren und an die Verletzungsstelle rekrutieren. Zirkulierende Fibrinogenproteine binden an die Fibrinogenrezeptoren auf den aktivierten Blutplättchen – und verbinden sie zu einem Blutplättchenpfropfen.

Visualisieren Sie den eingeschränkten Blutfluss, um den Blutplättchenpfropfen zu bestätigen – den primären Schritt der Thrombusbildung.