Injektion eines. stephensi Embryonen zu generieren Malaria-resistenter Moskitos

Anopheles stephensi Mücken sind Vektoren für Malaria bewohnen Indien und ganz Asien. Dieses Video zeigt die Technik für die Durchführung microinjections dieser Art mit Transgene, dass Widerstand gegen die Malaria, die Mücke wird zu verleihen. Ein großer Teil der Methodik in diesem Video gezeigt, ist für die Mikroinjektion Techniken anderer Mückenarten.

Alle 15 Sekunden stirbt ein Kind an Malaria in der Welt, hier im James-Labor, oder versucht, französische Mücken zu machen, die die Malaria-Personen nicht tragen können. Mein Name ist TIUs. Ich bin hier bei Universal of California, Irvine, in der Abteilung für Molekularbiologie und Biochemie im Labor von Anthony James.

Heute zeige ich Ihnen, wie man transgenes und nicht Stevens-Auge herstellt. Und wir tun dies, um Malariamücken widerspenstig zu machen, damit sie den Malariaparasiten nicht übertragen können. Jetzt habe ich ein Fläschchen mit isotonischem Puffer vorbereitet, wo die Mücken ihre Eier ablegen werden.

Ich werde diesen Aspirator verwenden, um die Mücken aufzusaugen und ein Fläschchen hineinzulegen. Dieses Fläschchen kommt dann in einen 30 Grad heißen Inkubator, und wir lassen es etwa eine Stunde lang in einer Tasse. Jetzt ziehen wir die Mikroinjektionsnadeln.

Das sind Nadeln aus Quarz und wir müssen eine sehr feine Spitze verwenden. Daher brauchen wir diese Nadelzieher. Wir verwenden einen Nadelabzieher von Suter instruments und auch die Nadeln von subtle in SU instruments.

Jetzt nehme ich die Mücken heraus und lege diese Eier in die Petrischale, wo ich ein Filterpapier habe, das mit isotonischem Puffer getränkt ist, der nur dazu dient, die Embryonen während der Injektionszeit feucht zu halten. Die Wassermenge auf dem Filterpapier ist entscheidend. Du willst nicht, dass die Eier herumschwimmen und du willst nicht, dass sie trocken werden.

Jetzt werde ich den Embryo aus dem Eipapier auf ein weiteres drei MM Watman-Papier bringen, das in isotonischem Puffer getränkt wurde. Tun Sie dies nun, um den Corian zu entfernen, bevor Sie sie für die Mikroinjektion ausrichten. Jetzt nehme ich das Corian weg, das ist diese silbrige Oberfläche auf den Eiern.

Und das tue ich, indem ich sie mit meinem Pinsel abbürste. Oben haben wir also einen Embryo, wo der Corian noch sitzt und sie haben diesen silbrig glänzenden Teil. Wo ist das untenstehende?

Ich habe es geschafft, den Corian herauszunehmen, und dieser wird wahrscheinlich auf einem Klebeband verrutschen, während der untere kleben bleibt. Und das ist es, was wichtig ist, wenn man eine unebene Seite fährt. Jetzt richte ich die Embryonen aus.

Die Embryonen sind am vorderen Ende größer oder größer, und den lege ich auf die rechte Seite. Links habe ich das Posterende, das schlanker ist und das ich, wo ich die Embryonen injizieren werde. Ich versuche, sie so zusammenzusetzen, dass sie sich gegenseitig helfen, in Position zu bleiben.

Und normalerweise mache ich etwa 10 in einer Reihe zusammen. Jetzt habe ich eine Linie, die Embryonen, und ich werde sie auf ein Deckglas übertragen. Auf dem Deckglas.

Ich habe Perückenband angebracht, damit sie kleben. Wenn ich damit fertig bin, trockne ich das Filterpapier, wo die Embryonen sitzen, mit einem anderen Filterpapier, lege die Embryonen auf den Deckschirm und lasse es 30 Sekunden trocknen, bevor ich Öl auftrage. Jetzt haben wir die Embryonen ausgerichtet und haben sie unter dem Öl.

Auf dem Mikroskoptisch injizieren wir DNA, die mit Lebensmittelfarbstoff vermischt ist, mit dieser speziellen Spitze des Mikrobenmusters Und injizieren diese in die Nadeln des Ports. Nun haben wir die Nadel gefüllt und wieder auf einen Mikroinjektor gesetzt. Und jetzt sind wir bereit, die Mikroinjektionen durchzuführen.

Jetzt bewege ich mich in der Nadel, um sie und mich zu schärfen, damit ich sie fokussiert sehen kann. Sobald das erledigt ist, bewege ich eine Gewichtsnadel und bewege die Embryonen und fokussiere sie ebenfalls. Und wenn das erledigt ist, bewege ich die Nadel wieder, bis ich sie in Position habe und meine Embryonen weiterbewege.

Wenn die Nadel nun durch das Öl dringt, wird es verschwommen und du musst es erneut anpassen. Das ist also genau Hai. Genau, Haizecke.

Und jetzt bin ich bereit, die Injektionen zu machen. Sie konnten sehen, dass ich den Embryo mit der Nadel berührte, und dabei brach ich die Spitze und Sie können sehen, wie ein kleines Tröpfchen herauskam, das in den Embryo injiziert wurde. Also hier injizieren und wieder rausholen.

Und ich überprüfe jedes Mal zwischen jedem Embryo, ob ein kleines Tröpfchen an der Spitze der Nadel herauskommt. Und wie Sie sehen können, muss ich mich für jeden Embryo neu anpassen, um in die perfekte Position zu kommen. Jetzt war dieser undicht.

Wie Sie sehen können, wird die Blase bei meiner zweiten Injektion in das Öl sehr groß und ich muss den Druck des Mikroinjektors neu einstellen. Jetzt sind wir mit den Mikroinjektionen fertig und werden die Embryonen vom Mikroskop in die Petrischale bringen, die wir mit isotonischem Puffer gefüllt haben. Ich werde das Öl vom Deckglas abwischen und in ein kleines Stück schneiden, das ich in die Petrischale lege.

Jetzt lassen wir sie hier bis zum Ende des Tages und bei Raumtemperatur. Und dann bewegen wir sie hinunter in das Unsektorische. Heute habe ich Ihnen gezeigt, wie man eine schreckliche Steven-Seite injiziert, um vorübergehende Mücken zu machen.

Und jetzt müssen wir nur noch darauf warten, dass die Larven schlüpfen, alle Larven schlüpfen. Wir werden die Erwachsenen aufziehen und dann paaren sie sich. Und danach haben wir drei Wochen Zeit, bevor wir einen Bildschirm starten können, ob sie Refactor sind oder nicht.