Eine Technik zur Generierung eines Mausmodells für Dextransulfat-Natrium-induzierte Kolitis

Um Kolitis - eine entzündliche Darmerkrankung - in einem Mausmodell auszulösen, nehmen Sie eine Maus, die in einem Käfig untergebracht ist.

Ersetzen Sie das Trinkwasser durch eine Lösung aus Dextransulfat-Natrium, DSS, einem Colitis-induzierenden Polysaccharid. Lassen Sie die Maus die Lösung konsumieren, um eine Kolitis zu entwickeln.

Beim Verzehr gelangt DSS in das Lumen des Dickdarms der Maus. Der Dickdarm enthält eine dicke Schleimschicht, die eine physikalische Barriere zwischen den kommensalen Mikroben und der darunter liegenden Epithelzell-Monoschicht bildet.

DSS dringt in die Schleimschicht ein und dringt in die Epithelzellen ein. In den Zellen verändert DSS die Expression von Tight-Junction-Proteinen und induziert Apoptose, was zu einer Störung der Epithelschicht und der Schleimhautbarriere führt. Dies ermöglicht den Eintritt luminaler Mikroben in die Lamina propria – das darunterliegende Gewebe mit den dort ansässigen dendritischen Zellen und Makrophagen.

Die Immunzellen erkennen die Mikroben und aktivieren die nachgeschaltete Signalgebung, um entzündungsfördernde Zytokine auszuschütten. Zytokine bewirken die Infiltration einer großen Anzahl von T-Zellen, die eine übertriebene Immunantwort auslösen, die zu Entzündungen führt.

Überwachen Sie die behandelte Maus auf Magen-Darm-Erkrankungen und Gewichtsverlust, was auf das Auftreten einer Kolitis hinweist.

Euthanasiere die Maus, isoliere chirurgisch den gesamten Dickdarm. Teilen Sie den Dickdarm in proximale, mittlere und distale Abschnitte und fügen Sie ein Fixiermittel zur Gewebekonservierung hinzu.

Das Gewebe ist bereit für nachgelagerte Assays zur Beurteilung der Kolitis.

Um Dextransulfat-Natrium oder DSS-Kolitis zu induzieren, ersetzen Sie das normale Trinkwasser sieben Tage lang durch 3%ige DSS-Lösung ad libitum und messen Sie täglich das Körpergewicht jeder Maus, den DSS-Lösungsverbrauch und die Stuhlproduktion. Am Ende der siebentägigen Behandlung bringen Sie die Maus in Rückenlage und machen Sie mit einer kleinen Schere einen drei Zentimeter langen Schnitt in der Mittellinie im Bauch.

Heben Sie dann den Dickdarm mit einer Pinzette an, damit er vom umgebenden Mesenterium getrennt werden kann, und extrahieren Sie den gesamten Dickdarm, bis der Blinddarm und das Rektum sichtbar sind. Das Gewebe am Kolozökalrand und tief im Becken durchschneiden, um den proximalen bzw. distalen Dickdarm zu befreien.

Messen und notieren Sie die Länge des isolierten Dickdarms und spülen Sie den Dickdarm mit einer 10-Milliliter-Spritze mit einer Sondennadel mit 10 Millilitern eiskaltem PBS aus, um den Kot und das Blut zu entfernen, bis das Eluat klar ist. Zur histologischen Identifizierung unterteilen Sie die Gewebeproben in gleich große proximale, mittlere und distale Schnitte und fixieren Sie das Gewebe über Nacht bei vier Grad Celsius in 4 % Paraformaldehyd.