JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:23 Min. • July 8th, 2025
Um die bakterielle Belastung in vivo zu messen, beginnen Sie mit sterilisierten Insektenlarven, die mit Bacillus Calmette-Guérin oder BCG lux vorinfiziert sind.BCG lux ist ein genetisch veränderter Mycobacterium bovis BCG-Stamm, der Luciferase exprimiert – ein Biolumineszenz produzierendes Enzym.
Übertragen Sie eine Insektenlarve in ein pufferhaltiges Lysingmatrixröhrchen mit Stahlkugeln. Homogenisieren Sie die Larve mit einem Homogenisator und geben Sie die intrazellulären Bestandteile, einschließlich Bakterien, in den Puffer ab.
Zentrifugieren Sie das Röhrchen, um das Homogenat aufzufangen und in ein Luminometerröhrchen zu übertragen.
Waschen Sie das Matrizenröhrchen mit einem reinigungsmittelhaltigen Puffer, um Zellfragmente zu lösen und verbleibende Bakterien freizusetzen.
Kombinieren Sie die Fraktionen in derselben Luminometerröhre und fügen Sie das Luciferase-Substrat hinzu. Substrate dringen in Bakterien ein und interagieren mit Luciferase-Enzymen, was zu Biolumineszenz führt. Laden Sie die Röhre in ein Luminometer und messen Sie die Biolumineszenz.
Das Luminometer misst die Intensität des emittierten Lichts und berechnet die relative Lichteinheit (RLU) – ein Hinweis auf die
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