JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 1:28 Min. • March 4th, 2025
Sammeln Sie fixierte Hirnschnitte von intrazerebralen Tollwutvirus-infizierten Mäusen in definierten postmortalen Intervallen.
Das Virus infiziert pyramidale Neuronen in der Großhirnrinde, und exprimierte virale Proteine lokalisieren sich in intrazytoplasmatischen granularen Strukturen, die als Einschlusskörper bekannt sind.
Behandeln Sie die Schnitte mit Ammoniumchlorid, um fixierungsinduzierte reaktive Gruppen zu neutralisieren und Hintergrundverfärbungen zu minimieren.
Tauchen Sie die Schnitte in Wasserstoffperoxid, um die endogene Peroxidase zu inaktivieren und unspezifische Signale zu reduzieren.
Tragen Sie eine Blockierungslösung auf, die ein Detergens enthält, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die spezifisch für die viralen Proteine sind.
Waschen und inkubieren Sie mit Biotin-konjugierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden.
Waschen Sie erneut und führen Sie Peroxidase-Enzym-konjugiertes Avidin ein, das an Biotin bindet, gefolgt von einem chromogenen Substrat, das das Enzym in ein farbiges Produkt umwandelt.
Visualisieren Sie die immunreaktiven Einschlusskörper, die virale Proteine enthalten, mit einem Mikroskop.
Mit zunehmender postmortaler Zeit wird der neuronale Abbau und das Verschwinden von Einschlusskörpern offensichtlich.