Transmissionselektronenmikroskopie von Lipofuszin-Granulaten in Neuronen

Beginnen Sie mit präfixiertem kortikalem Gewebe, wo Neuronen Lipofuszin-Granulat enthalten. Diese lipidreichen Granulate sammeln sich mit zunehmendem Alter an und werden mit neuropathologischen Erkrankungen in Verbindung gebracht.

Behandeln Sie das Gewebe mit Osmiumtetroxid, um die Zellstrukturen, einschließlich Lipofuszin, zu stabilisieren.

Behandeln Sie das Gewebe mit steigenden Konzentrationen von Ethanol, um es zu dehydrieren. Betten Sie es dann in Harz ein und schneiden Sie ultradünne Schnitte, um neuronale Strukturen freizulegen.

Montieren Sie das Profil auf einem unbeschichteten Kupfergitter.

Färben Sie den Abschnitt mit Uranylacetat, einem Schwermetallfleck.

Die Uranyl-Ionen interagieren mit zellulären Biomolekülen, einschließlich Lipiden, Proteinen und DNA.

Als nächstes färben Sie das Gewebe mit Bleicitrat, das schwach mit vorgebundenen Uranylionen interagiert und so den Kontrast zum Hintergrund verstärkt.

Legen Sie die gefärbte Scheibe unter ein Transmissionselektronenmikroskop, um sie einem fokussierten Elektronenstrahl auszusetzen.

Gefärbte Biomoleküle, die mit Schwermetallflecken angereichert sind, streuen Elektronen stark im Vergleich zum Hintergrund.

Lipofuszin-Granu