Vorbereitung von Schnitten des Rattenhirns für die elektronenmikroskopische Analyse der Integrität der Blut-Hirn-Schranke

Nehmen wir eine Ratte, die einem eingeschränkten Blutfluss zur rechten Gehirnhälfte ausgesetzt ist, was zu BHS-Schäden führt.

Injizieren Sie intravenös Fluorophor-markiertes Albumin, das die geschädigte BHS durchquert und das Gehirn erreicht.

Besorge dir chemisch fixierte Hirnabschnitte.

Fügen Sie einen Blockierungspuffer hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Applikation von Peroxidase-konjugierten Antikörpern, die auf das Fluorophor-markierte Albumin abzielen.

Fügen Sie ein chromogenes Substrat hinzu, das die Peroxidase in einen elektronendichten Niederschlag umwandelt.

Führen Sie Osmiumtetroxid ein, um Membranlipide zu fixieren und den Kontrast zu verbessern.

Dehydrieren Sie die Abschnitte mit zunehmender Alkoholkonzentration.

Fügen Sie Uranylacetat hinzu, das an Nukleinsäuren und Proteine bindet, um den Kontrast zu erhöhen.

Mit

steigender Alkoholkonzentration erneut dehydrieren und mit Propylenoxid zum Einbetten des Harzes abschließen. Betten Sie die Abschnitte in Harz ein.

Mikroskopische Identifizierung und Exzidierung der chromogengefärbten Regionen.

Betten Sie diese Abschnitte wieder in Harz ein und bereiten Sie ultradünne Scheiben vor.

Montieren Sie die Scheiben auf Elektronenmikroskopie-Gitter (EM).

Mit Bleicitrat färben, um den Kontrast der extrazellulären Matrix zu verbessern.

Fahren Sie mit EM fort, um die Integrität der BHS zu untersuchen.