JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 1:21 Min. • March 4th, 2025
Nehmen Sie einen Hirngewebeschnitt von einer Maus, die einer leichten chronischen zerebralen Hypoperfusion (MCCH) unterzogen wurde, und injizieren Sie Amyloid-Beta-Peptide.
MCCH zeichnet sich durch eine verminderte Durchblutung des Gehirns aus. Dadurch wird die Sauerstoff- und Nährstoffversorgung der Endothelzellschicht der zerebralen Blutgefäße eingeschränkt und die Zellen geschädigt.
Die Schädigung erhöht die Durchlässigkeit der Gefäßwand, so dass sich die injizierten Amyloid-Beta-Peptide in der Wand ansammeln und Plaques bilden können.
Waschen Sie den Abschnitt mit einem Puffer, um Chemikalienreste zu entfernen.
Inkubieren Sie mit Thioflavin S, einem fluoreszierenden Farbstoff, der an die Amyloid-Plaques bindet.
Waschen Sie die verschmutzte Stelle mit abnehmender Alkoholkonzentration, um ungebundene Farbstoffe zu entfernen und das Gewebe zu rehydrieren.
Legen Sie den Abschnitt in den Puffer, um die Hydratation aufrechtzuerhalten.
Montieren Sie den Abschnitt mit einem Einbettmedium, das die Fluoreszenzintensität des Farbstoffs beibehält.
Untersuchen Sie unter einem Fluoreszenzmikroskop das Vorhandensein von fluoreszenzmarkierten Amyloidablagerungen, um die MCCH-induzierte Amyloid-Beta-Aggregation zu bestätigen.