JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 1:30 Min. • March 4th, 2025
Nehmen Sie ein formalinfixiertes menschliches Gehirngewebe, das in Paraffin eingebettet ist. Das Gewebe weist pathogene Mikroben auf, die sowohl in den Zellen als auch extrazellulär vorhanden sind.
Waschen Sie, um das Paraffin zu entfernen, und rehydrieren Sie dann das Gewebe mit abnehmenden Alkoholkonzentrationen.
Mit einem sauren Puffer erhitzen, um die Formalin-induzierten Proteinvernetzungen aufzubrechen und antigene Epitope auf den Bakterien freizulegen.
Inkubieren Sie mit Ammoniumchlorid, um die während der Fixierung gebildeten reaktiven Aldehydgruppen zu neutralisieren und eine unspezifische Wechselwirkung mit Antikörpern zu verhindern.
Mit einem Reinigungsmittel behandeln, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und das Eindringen von Antikörpern zu erleichtern.
Tragen Sie eine Blockierungslösung auf, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf extrazelluläre und intrazelluläre Mikroben abzielen.
Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper auftragen, die an die Primärantikörper binden.
Fügen Sie einen fluoreszierenden DNA-bindenden Farbstoff hinzu, um die Zellkerne zu färben.
Die Behandlung erfolgt mit einem Autofluoreszenz-Eliminator, um die Fluoreszenz von autofluoreszierenden intrazellulären Granulaten zu löschen und so die Hintergrundsignale zu minimieren.
Untersuchen Sie das Gewebe mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie, um das Vorhandensein von Mikroben zu bestätigen.