Nachweis von phosphorylierten Tau-Proteinen in Gehirnproben von Mäusen mittels Western-Blot-Analyse

Beginnen Sie mit einem Maushirngewebe in einem Extraktionspuffer, der Proteaseinhibitoren und ein Detergens enthält.

Homogenisieren Sie das Gewebe, um Proteine in den Puffer freizusetzen. Die Proteaseinhibitoren blockieren die Proteaseaktivität und verhindern so den Proteinabbau.

Zentrifugieren und den Überstand mit Proteinen auffangen.

Fügen Sie einen Ladepuffer hinzu, der ein Detergens und ein Reduktionsmittel enthält, um das Protein zu denaturieren.

Laden Sie die Proteine aus der Kontrolle und der Probe auf ein SDS-PAGE-Gel. Wenden Sie ein elektrisches Feld an, um Proteine in verschiedene Banden zu unterteilen.

Nach der Elektrophorese übertragen Sie Proteinbanden auf eine Membran.

Behandeln Sie die Membran mit einem Puffer mit fettfreier Milch, um unspezifische Wechselwirkungen zu blockieren.

Inkubieren Sie mit Primärantikörpern, die spezifisch an phosphorylierte Tau-Proteine binden.

Waschen und Inkubieren mit enzymkonjugierten Sekundärantikörpern.

Fügen Sie ein Substrat hinzu, das mit dem Enzym reagiert, um ein Lichtsignal zu erzeugen, das die phosphorylierten Tau-Proteine bestätigt.

Eine intensiv leuchtende Bande in der Probe im Vergleich zur Kontrolle deutet auf eine neurodegenerative Pathologie hin.