JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:23 Min. • March 4th, 2025
Nehmen Sie einen rehydrierten Abschnitt von erkranktem menschlichem Gehirngewebe, das Lewy-Körperchen oder LBs enthält.
Inkubieren Sie mit Wasserstoffperoxidlösung, um endogene Peroxidasen zu hemmen und unspezifische Färbungen zu verhindern.
Erhitzen Sie den Schnitt in Citratpuffer, um Alpha-Synuclein-Epitope in den LBs zu demaskieren.
Tragen Sie ein Blockierungsmittel auf, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Entfernen Sie das überschüssige Blockierungsmittel und inkubieren Sie den Abschnitt mit primären Antikörpern, die auf Alpha-Synuclein abzielen.
Ungebundene Antikörper abwaschen.
Biotinylierte Sekundärantikörper auftragen, die an die Primärantikörper binden.
Entfernen Sie überschüssige Antikörper.
Fügen Sie Streptavidin-Biotin-Peroxidase-Komplexe hinzu, die an die biotinylierten Sekundärantikörper binden.
Ungebundene Komplexe abwaschen.
Tragen Sie ein farberzeugendes Substrat auf, das mit der Peroxidase reagiert und braune Ausfällungen bildet.
Entfernen Sie das überschüssige Substrat.
Mit einer Gegenfärbung behandeln, um die Zellkerne blau zu färben und den Kontrast gegen das braun gefärbte Alpha-Synuclein in den LBs im neuronalen Zytoplasma unter dem Mikroskop zu verbessern.