Elektronenmikroskopische Analyse der axonalen Schädigung im Sehnerv von Mäusen mit Hirnverletzung

Isolieren Sie den Sehnerv von transgenen Mäusen mit Hirnverletzungen in definierten Abständen nach der Verletzung. Der Nerv enthält Neuronen, die ein fluoreszierendes Protein exprimieren.

Visualisieren Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie den verletzten Nerv, der eine fortschreitende Zunahme von axonalen Schwellungen und Diskonnektoren aufweist.

Fixieren Sie das Gewebe, um die Zellstrukturen zu erhalten.

Spülen Sie das Tuch aus, um überschüssiges Fixiermittel zu entfernen.

Mit einer Osmium-Ferrocyanid-Lösung behandeln, die an die Lipide der Myelinscheide bindet und den Kontrast für die Bildgebung erhöht.

Spülen Sie das Gewebe aus und inkubieren Sie es in einer Schwermetallverbindung, die an Makromoleküle bindet und den Kontrast erhöht.

Entwässern Sie das Gewebe mit steigenden Alkoholkonzentrationen und betten Sie es in ein Harz ein.

Erhalten Sie Quer- und Längsschnitte und behandeln Sie diese mit Schwermetallverbindungen, um den Kontrast zu verbessern.

Unter dem Elektronenmikroskop zeigen die Längsschnitte eine fortschreitende Entwicklung axonaler Schwellungen mit akkumulierten geschwollenen Mitochondrien, Vesikel, Membranblasen und gestörten Zytoskelettstrukturen.

Die Querschnitte zeigen eine fortschreitende Störung der Myelinscheiden, was auf eine axonale Degeneration hinweist.