JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:17 Min. • March 4th, 2025
Heparansulfat, ein Glykosaminoglykan, ist in den Amyloid-Plaques enthalten, die mit der Alzheimer-Krankheit in Verbindung gebracht werden.
Um Heparansulfat sichtbar zu machen, beginnen Sie mit einem erkrankten menschlichen Hippocampus-Gewebeschnitt, der Amyloid-Plaques enthält.
Fixieren Sie den Gewebeschnitt mit einem Fixiermittel, um die Zellstrukturen zu erhalten.
Behandeln Sie anschließend das Gewebe mit einem Blockierungsmittel, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie ein nichtionisches Detergens hinzu, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.
Inkubieren Sie das Gewebe mit primären Antikörpern, die spezifisch auf Heparansulfat in den Amyloid-Plaques abzielen.
Ungebundene Primärantikörper abwaschen.
Fügen Sie dann Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper hinzu, die an die an Heparansulfat gebundenen Primärantikörper binden.
Entfernen Sie alle ungebundenen Antikörper.
Färben Sie die Zellkerne mit einem Fluoreszenzfarbstoff.
Zum Schluss wird mit einem Fluoreszenzmikroskop das fluoreszenzmarkierte Heparansulfat in den Amyloid-Plaques und die blau gefärbten Zellkerne im erkrankten Gewebeschnitt sichtbar gemacht.