JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 1:28 Min. • March 4th, 2025
Beginnen Sie mit der Zerebrospinalflüssigkeit (CSF), die von Personen unterschiedlichen Alters gesammelt wird.
Zentrifugieren Sie die Probe, um Zelltrümmer zu pelletieren und den Überstand aufzufangen.
Der Überstand enthält Proteine, die an der Neuronenbildung oder Neurogenese beteiligt sind.
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die mit Streptavidin beschichtet ist. Fügen Sie einen Blockierungsagenten hinzu, um unspezifische Bindungen zu verhindern.
Fügen Sie Biotin-markierte Capture-Antikörper hinzu, die selektiv für die spezifischen Neurogenese-bezogenen Proteine sind.
Inkubieren Sie unter Rühren, um die Antikörper an Streptavidin zu binden, und waschen Sie dann die Platte.
Geben Sie die Liquorprobe zusammen mit Ruthenium-markierten Nachweisantikörpern in die Vertiefungen und inkubieren Sie sie dann unter Rühren.
Die spezifischen Proteine, die mit der Neurogenese in Verbindung stehen, binden an Fängerantikörper und interagieren gleichzeitig mit Nachweisantikörpern.
Waschen Sie die Platte gründlich und fügen Sie einen Detektionspuffer hinzu.
Legen Sie die Platte in ein bildgebendes System.
Der Detektionspuffer löst die Lichtemission des Rutheniums aus.
Eine Abnahme der Lichtintensität in den Proben deutet auf eine altersbedingte Verringerung der Neurogenese-bezogenen Proteinspiegel hin, was einen Rückgang der Neurogenese bestätigt.