Untersuchung von Zell-Zell-Interaktionen zur Erleichterung der neuronalen Reifung

Beginnen Sie mit einer Co-Kultur von Astrozyten und differenzierenden neuronalen Stammzellaggregaten in Differenzierungsmedien.

Astrozyten sezernieren Signalmoleküle, die die Reifung und Differenzierung von Stammzellen zu Neuronen und Astrozyten fördern.

Fügen Sie dann ein Fixiermittel hinzu, um die Zellstruktur zu erhalten, und waschen Sie es anschließend.

Fügen Sie eine Waschmittellösung hinzu, um die Zellmembranen zu permeabilisieren, und waschen Sie sie dann.

Führen Sie ein Blockierungsreagenz ein, um unspezifische Bindungsstellen zu blockieren.

Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die spezifisch an Proteinmarker reifer Neuronen und Astrozyten binden. Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Fügen Sie dann grün und rot fluoreszierend markierte Sekundärantikörper hinzu und inkubieren Sie. Diese Antikörper binden an die jeweiligen Primärantikörper und sorgen so für eine ausgeprägte Fluoreszenz der Zellen.

Führen Sie einen Kernfarbstoff ein, um die Kerne blau zu färben.

Beobachten Sie abschließend die Zellen mit einem konfokalen Mikroskop.

Innerhalb der Aggregate weisen grün fluoreszierende Zellen auf reife Neuronen hin, während rot fluoreszierende Zellen Astrozyten darstellen. Dies bestätigt Zell-Zell-Interaktionen bei der Erleichterung der neuronalen Reifung.