JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:23 Min. • March 4th, 2025
Nehmen Sie ein chemisch fixiertes Gehirn von einer Maus, die chronischem Stress ausgesetzt ist.
Stress beeinträchtigt die Funktion der Oligodendrozyten und stört die lipidreiche Myelinscheide, die die neuronalen Axone im medialen präfrontalen Kortex, einer Gehirnregion, die Emotionen reguliert, umgibt.
Tragen Sie das Fixiermittel erneut auf, um die Gewebearchitektur zu erhalten. Tauchen Sie das Gewebe in ein Kryoprotektivum, um Wasser zu ersetzen und die Bildung von Eiskristallen während des Einfrierens zu verhindern.
Frieren Sie das Gehirn ein und teilen Sie es dann in koronale Scheiben.
Montieren Sie die Scheiben auf Objektträger und rehydrieren Sie sie dann in Wasser, um das Eindringen von Flecken zu verbessern.
Die Scheiben in einer goldionenhaltigen Lösung erhitzen. Diese Ionen binden selektiv an Lipide in der Myelinscheide und bilden metallische Goldablagerungen, die die myelinisierten Neuronen markieren.
Mit einem Reduktionsmittel erhitzen, um überschüssige Goldionen zu reduzieren, dann spülen, um sie zu entfernen und das Gewebe mit steigenden Alkoholkonzentrationen zu dehydrieren.
Verwenden Sie Xylol, um die Gewebetransparenz zu erhöhen und die Objektträger zu montieren.
Visualisieren Sie mit Hilfe der Mikroskopie die goldgefärbten myelinisierten Neuronen und beurteilen Sie stressbedingte Veränderungen.