Fokussierte Ionenstrahl-Rasterelektronenmikroskopie für die 3D-Rekonstruktion synaptisch verknüpfter Neuronen

Nehmen Sie einen fixierten Schnitt aus kortikalem Hirngewebe der Maus, das neuronale Axone und Dendriten aufweist. Die Dendriten besitzen Ausstülpungen, die als dendritische Stacheln bekannt sind und Synapsen mit Axonen bilden.

Inkubieren Sie das Gewebe mit Osmium-Ferrocyanid, das an Lipide bindet, gefolgt von einer weiteren Osmiumanwendung, die den strukturellen Kontrast für die Bildgebung erhöht.

Mit einer Schwermetallverbindung färben, die an Makromoleküle bindet und den Kontrast verstärkt.

Dehydrieren Sie mit steigenden Alkoholkonzentrationen zum Einbetten des Harzes.

Betten Sie das Gewebe in Harz ein, montieren Sie es auf eine Halterung und beschichten Sie es mit Gold, um die Bildqualität zu optimieren.

Nutzen Sie die fokussierte Ionenstrahl-Rasterelektronenmikroskopie für die dreidimensionale Bildgebung.

Verwenden Sie einen Ionenstrahl, um eine dünne Schicht aus in Harz eingebettetem Gewebe zu entfernen und eine Bildgebungsoberfläche freizulegen.

Fokussieren Sie einen Elektronenstrahl auf die belichtete Oberfläche und detektieren Sie die rückgestreuten Elektronen, um ein Bild zu erzeugen.

Führen Sie serielles Schneiden und Imaging durch und rekonstruieren Sie ein dreidimensionales Bild, das ein synaptisch verknüpftes kortikales neuronales Netzwerk enthüllt.