JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:30 Min. • August 29th, 2025
Beginnen Sie mit einer betäubten neugeborenen Ratte, die auf ein Heizkissen mit freiliegendem Ischiasnerv gelegt wird.
Heben Sie die distale Stelle des Nervs an und injizieren Sie eine Plasmid-DNA-Lösung, die mit einem Farbstoff gemischt ist. Der Farbstoff hilft, die Plasmidabgabe zu verfolgen.
Platzieren Sie eine Pinzettenelektrode um den Nerv und halten Sie dabei einen kleinen Abstand zwischen den Elektrodenarmen aufrecht.
Führen Sie Kochsalzlösung in diesen Spalt ein, um die Stromleitung zu fördern.
Wenden Sie einen elektrischen Impuls an, der die Nervenfasern umgibt und transiente Membranporen in den Schwann-Zellen erzeugt. Kehren Sie dann die Elektrodenpositionen um und legen Sie einen zweiten elektrischen Impuls an. Dadurch wird der Eintritt der Plasmid-DNA durch die Poren verbessert.
Nach der Elektroporation versiegelt sich die Zellmembran wieder und fängt das Plasmid ein.
Reinigen Sie die Stelle, versiegeln Sie den Hautschnitt, desinfizieren Sie ihn und lassen Sie die Ratte sich erholen.
Später wird die Plasmid-DNA in den Zellkern transloziert und in die DNA der Schwann-Zellen integriert, was einen erfolgreichen Gentransfer ermöglicht.
Ziehen Sie vorsichtig mit einer Nadel an der d
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