Ophthalmologische Wirkstoffverabreichung für nichtinvasive Neuromodulation in einem Mausmodell

Beginnen wir mit einer genetisch veränderten Maus, deren Hippocampus-Neuronen Designer-Rezeptoren exprimieren, die ausschließlich durch Designerdrogen oder DREADDs aktiviert werden.

Diese manipulierten Rezeptoren reagieren selektiv auf synthetische Testmedikamente, während sie nicht auf endogene Moleküle reagieren.

Reinigen Sie die Maus regelmäßig, um Stress zu minimieren und sie an das Verfahren zu gewöhnen.

Wiegen Sie als Nächstes die Maus, um die richtige Medikamentendosis zu berechnen.

Verwenden Sie während der Handhabung der Maus ein schwaches rotes Licht, um zirkadiane Störungen zu vermeiden.

Schieben Sie die Maus vorsichtig an, um sie bewegungsunfähig zu machen.

Nehmen Sie mit einer Pipette die Testlösung und formen Sie an der Spitze ein Tröpfchen. Nähern Sie sich nun dem Auge

und lassen Sie das Tröpfchen auf seine Oberfläche fallen.

Bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück. Wiederholen Sie die Verabreichung des Arzneimittels mehrmals.

Das Medikament wird über das Auge absorbiert und gelangt in das Gehirn.

Dann überquert es die Blut-Hirn-Schranke und erreicht die Hippocampus-Region. Später bindet es an DREADD-Rezeptoren und aktiviert Neuronen, was eine präzise, nicht-invasive Neuromodulation ermöglicht.

Bei wiederholter CNO-Verabreichung, die vier Wochen nach der Injektion beginnt, gewöhnen Sie die Tiere an den Umgang, indem Sie jede Maus drei bis vier Tage lang täglich drei Minuten vor der Verabreichung der Augentropfen behandeln. Wenn sich die Mäuse an den Umgang gewöhnt haben, wiegen Sie jede Maus, um die geeignete Menge an CNO zu bestimmen, die abgegeben werden muss, um eine Konzentration von einem Milligramm CNO pro Kilogramm Körpergewicht zu erreichen.

Laden Sie zwei Stunden vor dem Ausschalten des Lichts während der inaktiven Phase ein bis drei Mikroliter der vorbereiteten CNO-Lösung in eine P10-Mikropipette und immobilisieren Sie die Maus durch Scrubfen. Stoßen Sie die Lösung langsam aus, bis sich ein stabiler Tropfen auf der Pipettenspitze bildet, und bringen Sie den Tropfen vorsichtig in die Nähe der Hornhaut, bis die Lösung abgegeben wird, ohne die Pipettenspitze mit dem Auge der Maus zu berühren. Bringen Sie dann die Maus in ihren Heimatkäfig zurück, bevor Sie den CNO-Augentropfen auf das Auge des nächsten Tieres auftragen.

In Fällen, in denen CNO während der aktiven Phase der Maus verabreicht werden muss, stellen Sie sicher, dass ein schwaches rotes Licht vorhanden ist, um den Tiertransport und die CNO-Abgabe zu gewährleisten.