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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:12 Min. • August 29th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur von Staphylococcus aureus, einem Bakterium mit einer dicken Peptidoglykan-Zellwand.
Verdünnen Sie die Kultur in frischen Medien, die Antibiotika enthalten, und inkubieren Sie sie bei warmer Temperatur unter Schütteln, um das Bakterienwachstum zu fördern.
Übertragen Sie die Kultur in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie sie, um die Bakterien zu pelletieren.
Entsorgen Sie den Überstand und legen Sie das Pellet auf Eis, um die Bakterien vor Schäden zu schützen.
Resuspendieren Sie das Pellet in Lysepuffer und geben Sie es in ein Röhrchen mit Kieselsäurekügelchen.
Führen Sie das Röhrchen in ein mechanisches Zelllyseinstrument ein und leiten Sie das Rühren ein.
Schnelle Kollisionen zwischen den Bakterien und den Kügelchen erzeugen Scherkräfte. Dabei werden die Bakterien lysiert, wobei DNA, RNA und RNA-Protein-Komplexe freigesetzt werden.
Ionen im Lysepuffer stabilisieren RNA-Strukturen, während Reduktionsmittel im Puffer RNA-abbauende Enzyme inaktivieren.
Zentrifugieren Sie nun die Mischung erneut, um die Ablagerungen zu pelletieren.
Sammeln Sie den Überstand mit Nukleinsäuren und Proteinen für die weitere Analyse.
Züchten Sie eine Kolonie von Stämmen, die entweder pCN51 P3 M
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