JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:37 Min. • August 29th, 2025
Nehmen wir Bakterienkolonien, die mit einem Plasmid transformiert wurden, das ein induzierbares Gen enthält.
Wählen Sie eine einzelne Kolonie aus, um frische flüssige Medien zu impfen.
Inkubieren Sie mit Schütteln für Sauerstoffversorgung und homogenes Bakterienwachstum.
Verwenden Sie eine verdünnte Kulturprobe, um die Absorption zu messen und die Zelldichte abzuschätzen.
Nehmen Sie eine Vertiefungsplatte mit schwarzen Wänden und Glasboden, um Lichtübersprechen zwischen den Proben zu verhindern und eine genaue Lumineszenzquantifizierung zu gewährleisten.
Geben Sie die Bakterienkultur mit der gewünschten Zellkonzentration in die Wells.
Fügen Sie ein Antibiotikum hinzu, um die Plasmidretention aufrechtzuerhalten.
Fügen Sie einen Induktor hinzu, um die Genexpression zu initiieren.
Das Gen kodiert für ein Enzym, das mit einem bestimmten bakteriellen Protein reagiert, um Licht zu erzeugen, was den Bakterien biolumineszierende Eigenschaften verleiht.
Legen Sie einen Deckel auf die Platte, um eine Verdunstung zu verhindern, bevor Sie sie in einen temperaturgesteuerten Plattenleser mit ständigem Schütteln legen.
Zeichnen Sie in regelmäßigen Abständen die Absorption auf, um die Zellzahl und die Licht
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