Kultivierung von Mycobacterium tuberculosis unter eisenbeschränkten Bedingungen

Beginnen Sie mit einer Agarplatte, die Mycobacterium tuberculosis-Kolonien enthält, die auf einem nährstoffangereicherten Medium gezüchtet wurden.

Impfen Sie ein einzelnes Volk in eine nährstoffhaltige Brühe und brüten Sie es unter Rührwerk für ein gleichmäßiges Wachstum.

Lassen Sie die Kultur die späte logarithmische Phase erreichen, in der die Zellen metabolisch aktiv sind.

Pipettieren Sie ein kleines Volumen auf eine angereicherte Agarplatte, verteilen Sie es gleichmäßig und inkubieren Sie, bis sich eine durchgehende Bakterienschicht bildet.

Befeuchten Sie einen sterilen Tupfer mit einem eisenarmen Minimum Medium (LIMM) und sammeln Sie die Bakterien.

Hängen Sie sie in einem Plastikbehälter mit LIMM auf, um eine Eisenkontamination zu vermeiden.

Fügen Sie ein Dispergiermittel hinzu, um ein Verklumpen zu verhindern, und inkubieren Sie ohne Schütteln.

Unter eisenlimitierenden Bedingungen aktivieren Bakterien Stressreaktionen und produzieren Siderophore im Zytoplasma.

Diese werden in extrazelluläre Vesikel verpackt und an die Umgebung abgegeben.

Siderophore fangen Eisen ein und helfen Bakterien zu überleben.

Dieses System unterstreicht die Anpassung und das Überleben von Mykobakterien unter ei