Isolierung von siderophorhaltigen extrazellulären Vesikeln aus Mycobacterium tuberculosis

Nehmen Sie eine Mycobacterium tuberculosis-Kultur , die in einem eisenlimitierenden Medium gezüchtet wurde, um die Sekretion von extrazellulären Vesikeln zu verbessern, die Siderophore, einen Eisenchelator, enthalten.

Zentrifuge, um die Bakterien zu pelletieren.

Sammeln Sie den Überstand und filtern Sie ihn, um restliche Bakterien zu entfernen.

Übertragen Sie das Filtrat in ein gerührtes Ultrafiltrationssystem und einen Filter, um überschüssiges Medium zu entfernen und die Elektrofahrzeuge zu konzentrieren.

Zentrifugieren Sie das Konzentrat, um zelluläre Trümmer zu pelletieren.

Übertragen Sie den Überstand in ein Ultrazentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie, um das EV-Pellet aufzufangen.

Entsorgen Sie den Überstand, resuspendieren Sie das Pellet in einem Puffer und mischen Sie es mit einem konzentrierten Dichtegradientenmedium, um die untere Schicht zu bilden.

Überlagern Sie es mit abnehmenden Konzentrationen des Gradientenmediums, um einen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu erzeugen.

Oben Puffer hinzufügen und zentrifugieren. Die Elektrofahrzeuge wandern in die Schicht, die ihrer Auftriebsdichte entspricht.

Sammeln Sie jede Fraktion in einem separaten Röhrchen.

Die gereinigte Frakti